细胞H/R（缺氧/复氧）模型建立实验流程
实验准备
- 细胞株选择：常用的细胞株有心肌细胞、神经细胞等，根据研究目的选择合适的细胞株。
- 试剂与仪器：准备DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二氧化碳培养箱、离心机、缺氧培养箱等。
细胞培养
- 复苏细胞：从液氮中取出细胞株，迅速放入37℃水浴中复苏，然后接种于培养瓶中，加入含10%胎牛血清的DMEM培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中培养。
- 传代培养：待细胞融合至80% - 90%时，用胰蛋白酶消化，按1:2或1:3的比例进行传代。
缺氧处理
- 制备缺氧培养基：将DMEM培养基用氮气饱和30分钟，以去除培养基中的氧气，然后加入适量的还原剂如连二亚硫酸钠，使培养基处于缺氧状态。
- 细胞接种与缺氧培养：将处于对数生长期的细胞接种于培养板中，待细胞贴壁后，弃去正常培养基，加入缺氧培养基，然后将培养板放入缺氧培养箱中，调节氧气浓度至1% - 5%，培养一定时间，如6 - 24小时。
复氧处理
- 更换培养基：缺氧培养结束后，取出培养板，弃去缺氧培养基，用预热的正常DMEM培养基轻轻冲洗细胞2 - 3次，然后加入正常培养基。
- 复氧培养：将培养板放入正常的二氧化碳培养箱中，在37℃、5%CO₂条件下继续培养，复氧时间一般为1 - 24小时。
检测与评估
- 细胞活力检测：采用MTT法、CCK - 8法等检测细胞活力，计算细胞存活率。
- 细胞凋亡检测：可以用Annexin V - FITC/PI双染法，通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。
- 相关指标检测：根据研究目的，检测细胞内相关基因和蛋白的表达变化，如通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达，用qRT - PCR检测相关基因的mRNA水平。
在整个实验过程中，需严格控制实验条件，设置正常对照组和其他必要的实验组，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，应进行预实验以确定最佳的缺氧和复氧时间等参数。
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