实验室新来了一个师弟,老板让其从养细胞开始。这个小师弟是个夜猫子,总喜欢深夜做实验。一天早上:
小师弟:湿胸,昨天传的细胞没贴壁,培养液变成紫红色的了。是不是你给我的那皿细胞是不好的?
科研狗:你操作没毛病?
小师弟:绝对没毛病,严格遵循你的指示。为了怕孵箱细胞太多,我特意单独放在另外一个孵箱里。
科研狗:等等,另外一个孵箱?没有接通CO2啊
今天我们来聊一聊培养液中的颜色,一般情况下,我们购买回来的DMEM培养基都是鲜红色的,如下图:
但是,作为老司机的你肯定也见过如下颜色的:
还有这样颜色的:
小师弟:师兄,你见过赤橙黄露青蓝紫的吗?
科研狗:...
1. 为什么这个DMEM培养基是鲜红色的?
这个问题可以从如下两个方面来回答:
业余回答:
A 它总要有一个颜色吧,如果是绿色的或者你会问他为什么是绿色的
B 红色的看上去有食欲,细胞自然喜欢吃了。你想想,给你一堆绿了吧唧的水果和给你一堆鲜红的水果,你喜欢吃哪一种?
专业回答:
培养基的颜色主要是酚红来显示的,酚红指示颜色非常灵敏,p值范围为6-8,颜色由黄变为紫红。酚红不是必须的,在有些情况下甚至是多余的,酚红有类似固醇类激素的作用,如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养,最好不要添加。但是为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸了,就显示偏黄色,偏碱性了就显示偏紫色。
2. 为什么培养皿放在一个没有开启CO2的孵箱里面,培养液颜色偏紫色?
一般的DMEM使用的缓冲体系是NaHCO3, 初中的时候应该见过如下的方程
2NaHCO3=Na2CO3+CO2+H2O
在没有CO2的孵箱中,培养液中的CO2一直溢出,碳酸变少了,溶液变碱性了,就偏紫色了。同时我们打开了很久的DMEM瓶里面的培养液也会慢慢偏紫色,也就是这个道理。
3. 什么时候溶液会变为黄色?
这个简单,一般污染细菌的时候或者长时间不换液,溶液变为黄色主要是酸性物质太多,细菌和细胞过度增长都会产生酸性物质,溶液会变为黄色。
4. 培养基偏紫色了还能用不?
可以将该偏紫色的培养基置于CO2孵箱中,拧松瓶盖。一段时间之后你会发现颜色变为鲜红色了,那么可以继续接着用。但是不要使用过长时间未用完并且变色的培养液,置于空气下氧化之后培养基成分可能已发生了变化。
5. 哪些情况下不得使用酚红?
如前面所说的酚红有类似固醇类激素的作用,如果涉及到固醇类激素相关的细胞培养,不要添加。另外在做流式细胞的时候,酚红会对结果产生影响,因此也不要添加。
6. 有没有不受CO2影响的培养基?
有,如果缓冲体系不是NaHCO3,而是其他体系如HEPES,就不受CO2的影响。
7. 常用的培养基有哪些?
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