WB实验时，为什么拔梳子胶老歪？有办法补救吗？

别忽视，东极生物实验室提醒大家，在Western Blot实验中，上样前我们除了配胶、装板以及配制电泳缓冲液外，拔梳子也是一个关键步骤，搞不好你的胶就歪了！拔梳子时遇到胶歪的情况，不仅会影响蛋白上样的准确性，还会导致实验结果的不可靠性，又得重来！

为什么拔梳子会出现胶歪的情况呢？

最常见（新人常犯）的问题就是时机未到，胶尚未完全凝固，你就拔梳子了。胶尚未完全凝固时，就开始装板加入电泳缓冲液拔梳子，就很容易造成胶瞬间流动或胶柱残缺不全，最终导致上样孔变形。而如果胶到时间还未完全凝固，我们建议你可以查下是不是试剂的有效性出问题了、配比错误或混合不均匀等情况。

其次，梳子与玻璃板不匹配也有可能，如果梳子与玻璃板之间存在间隙或梳子插入时过于紧密，都可能在拔梳子时导致胶歪。因此，东极生物提醒，在灌胶前应先测试梳子是否与玻璃板匹配。

也不排除你拔梳子方式不正确，拔梳子时用力不均或过快过猛，都可能使梳子孔道的胶发生歪斜。正确的拔梳子方式应该是双手在梳子两边均匀用力，动作缓慢轻柔，边拔边看，保证梳子水平地拔出。

当然，温度也会造成影响的，尤其是到冬天，整体气温较低，如果真是温度问题，我们建议你，在实验室做实验的时候，凝胶凝固时间适当延长。

最后，还可以看看是不是梳子上有杂质，因为如果梳子上残留有杂质，在插入胶中时会影响到胶的完整性，拔取时可能会造成上样孔及胶柱不全的情况。

胶已经歪了，那丢掉吗？有补救的办法吗？

方法当然是有的，东极生物觉得，这个方法你可以试试！

使用5 mL注射器，然后将注射针头放于胶柱倾倒处，轻柔多次拨弄，可以慢慢让胶柱还原。如果胶柱歪倒非常严重，只要保证样品可以加进去即可停止操作。另外，出现胶柱变形后，在上样时，我们建议你，这时候选择使用细长的枪头，比如20 uL白色枪头，这样可以避免样品在胶柱上沉积困难的情况。