01.为什么要在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液?
答:胰蛋白酶在4℃就可能开始降解,如果在室温下放置超过30分钟,就会变得不稳定,但是胰酶在消化细胞前必须要预热,否则容易出现酶活力不够, 也会导致细胞消化不下来,所以为了更好的培养细胞,在细胞培养不多的时候可以分装使用,这样就不会出现上面的两种情况了,还有就是配制胰酶的时候一定要注意降低热源哦。
02.培养细胞生长减慢的原因有哪些?其解决办法有哪些?
答:可能得原因有:更换了不同的培养液或血清;培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏;培养物中有少量细菌或真菌污染;试剂保存不当;比较新培养液与原培养液组分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找到可能的原因。
解决办法:增加起始培养细胞浓度;让细胞逐渐适应新培养液;换入新鲜配制培养液;补加谷氨酰胺或生长因子等;用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培养液需在2-8℃避光保存;含血清完全培养液在2-8℃保存,并在2 周内用完;分离培养物,检测支原体。
03.如何消除组织培养的污染?
答:当重要的培养细胞污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素和抗霉菌素如时尤其重要。
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