一、 实验材料：
TUNEL试剂盒
多聚甲醛
二甲苯
乙醇
PBS
H2O2
TRITON X-100
甲醇
二、 实验仪器：
显微镜 二氧化碳培养箱
烘箱:
三、 实验步骤（细胞爬片或者冰冻切片）：
a. 按照实验订单内容进行细胞爬片或准备好冰冻切片，加4%多聚甲醛进行固定，室温固定20-30min。
b. PBS洗涤3次，每次5min。
c. 通透：1%Triton X-100 处理样本，室温下通透3-5min。
d. PBS洗涤3次，每次5min。
e. 配制TdT酶反应液：计算好样本量，每个样本用量为：在45μl Equilibration Buffer 加入1.0μl biotin-11-dUTP和4.0μl TdT Enzyme，即配即用，注意避光。
f. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加50μl TdT酶反应液，放入避光的湿盒中，37℃避光反应60min。
g. PBS洗涤3次，每次5min。
h. Streptavidin-TRITC试剂按每个样本5μl用量和45μl Labeling Buffer 混匀，计算所需总量。即用即配，注意避光。
i. 样本周围用吸水纸吸干，每个样本上滴加50μl Streptavidin-TRITC 标记液，放入湿盒，37℃避光反应30min.
j. PBS洗涤3次，每次5min。
k. DAPI(Hoechst)染色液复染细胞核，室温避光反应15min。
l. PBS洗涤3次，每次5min。
m. 荧光显微镜下观察,激发波长543nm,发射波长571nm。
四、 实验步骤（石蜡切片）：
a. 石蜡切片按照常规方法进行脱蜡，60℃烘片60min。二甲苯脱蜡2次，乙醇水合（100%，95%，80%，75%）：每次5min
b. 通透：1%Triton X-100 处理样本，室温下通透3-5min.
c. PBS洗涤3次，每次5min。
d. 配Proteinase K 工作液：每个样本按98μl PBS加入2μl 50X Proteinase K, 即用即配：每个样本上滴加100μl Proteinase K 工作液。37℃反应30min。
e. PBS洗涤3次，每次5min。
f. 后续步骤参考细胞标本步骤（e~m）
五、 注意事项:
1. 全程实验注意避光。
2. 试剂盒每个样本实际用量只有50μl，所以细胞不建议用孔板，建议爬片。
3. 试剂现用现配。
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