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Transwell侵袭实验方法

作者:admin 浏览量:23 来源:本站 时间:2023-01-19 17:06:23

信息摘要:

概念:这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1.Transwell关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性的杯状的装置,根据Corning公司的Transwell说明

概念:

这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell
关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性的杯状的装置,根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍,可以认为这是一种膜滤器(Membrane filters),也可认为是一种有通透性的
支架(permeable supports)。

更准确地说,Transwell应该是一种实验技术,这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对Transwell会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。


Transwell 实验操作步骤:

一、Transwell小室制备
1.  无基质胶Transwell小室制备
① 包被基底膜:
用50 mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面,4 ℃风干。如果需要在下室面铺FN的话,可将200 ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原(collagen)的话,一般配成0.5 mg/ml,直接用枪吸了涂在膜上。
② 水化基底膜:
吸出
培养板中残余液体,每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液,37 ℃,30min。另有tianjin_glioma战友提供的方法:在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60-80 ?l (注意体积不可太大,以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好),置37 ℃ 30 min使Matrigel聚合成凝胶


Transwell的其他应用的实验步骤

1.Transwell肿瘤细胞迁移实验
过程与Transwell侵袭实验基本一致,不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为,由于没有基质胶的阻挡,细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快,所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105,而迁移实验的密度是1×106。另外,下层培养液的FBS浓度也可适当下调,我做侵袭实验的浓度是5%,迁移实验的浓度是2.5%。
2.Transwell上皮细胞培养步骤

做了一段时间的原代细胞培养,把经验拿出来跟大家分享一下吧,请有关战友共同探讨:
(1). 将雄性wistar
大鼠麻醉,开胸,将气管取出,置于4℃含0.1%胰蛋白酶XIV (Sigma),100 U/ml青霉素和100ug/ml链霉素(Gibco-BRL)、无Ca 2+、Mg2+,无血清的MEM。
(2). 用无菌的细胞刮棒刮气管内壁,将所得溶液离心后得到游离细胞。

网站出自:细胞实验外包   想了解更多请关注:http://www.do-gene.com