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脊髓损伤模型

应用简介 脊髓损伤的修复与治疗是医学界面临的一大难题。脊髓损伤模型种类繁多,各有其优缺点,在应用时应根据具体实验研究目的和条件作出科学的选择。目前,国内脊髓损伤实验研究最常选用的动物是大白鼠、兔、猫、犬。体型较大的动物在实际的实验操作中存在如下不利因素:手术操作步骤相对复杂,

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应用简介
       脊髓损伤的修复与治疗是医学界面临的一大难题。脊髓损伤模型种类繁多,各有其优缺点,在应用时应根据具体实验研究目的和条件作出科学的选择。目前,国内脊髓损伤实验研究最常选用的动物是大白鼠、兔、猫、犬。体型较大的动物在实际的实验操作中存在如下不利因素:手术操作步骤相对复杂,切口容易感染,容易死于术后的脊髓损伤并发症,一定程度影响了实验结果。大鼠作为一种价格便宜、容易饲养的动物,作为制作脊髓损伤模型还有如下特点:再现性好;临床相关性好;与人类高度同源性;重复性强;适应范围广;操作简单;死亡率低等。常见的脊髓损伤动物模型有脊髓撞击损伤模型、脊髓压迫损伤模型、脊髓切割损伤模型、切除型脊髓损伤模型等。
肺纤维化模型构建
       目前肺纤维化动物模型可分为基应相关模型与非基因模型,前者主要是指工程动物模型,非基因模型主要指在相同或相似的遗传背景下,通过环境因素,药物/毒物或其它因素诱导得到的肺纤维化模型。
肝纤维化常用模型有化学毒性试剂诱导法(四氯化碳诱导,硫代乙酰胺诱导),胆管阻塞法(胆管结扎或寄生虫),乙醇诱导法以及免疫法。
实验方法
一、Allen’s脊髓损伤模型建立
       ①取成年雌性SD大鼠(220~250g),用2%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔内注射麻醉、固定(包括头部)。备皮消毒后,在无菌条件下切开皮肤、浅筋膜。
       ②用器械沿T8~T10两侧棘突顺竖脊肌群走向钝性分离肌肉和韧带,清晰暴露T9棘突和椎弓,有齿镊轻提T9棘突,用眼科剪沿T9、T10椎弓间隙轻轻咬开椎弓根部,并逐渐咬除T9椎弓,暴露T10段脊髓。
       ③采用改良的Allen装置,打击装置整合于立体定位仪上,将一打击面直径为3mm圆形薄铜垫片(面积7.075mm2,重量0.1g)置于T10节段脊髓表面,以重10g的砝码自5cm高处自由坠落打击该垫片,致伤量为50g·cm,造成T10节段脊髓的冲击伤。
       ④撞击成功后会发现大鼠后肢伸展,尾巴左右摇晃。手术结束,再次消毒,逐层缝合肌肉、皮肤。假手术组4只仅行棘突和椎板切除,不损伤脊髓,大鼠无行为学及后肢运动功能改变。
       ⑤术后动物被放在30℃的加热垫上复苏,待清醒后室温饲养,自由饮食。截瘫大鼠膀胱区人工按压排尿,每天2次,直到膀胱排空功能恢复,防止并发症。
二、切除型脊髓损伤模型
       ①室温条件下以6%水合氯醛(30 mg/kg)腹腔内注射麻醉两组大鼠,外科备皮,固定于鼠板,外科消毒,铺无菌巾;
       ②沿背正中线切开背部皮肤,锐性分离筋膜、椎旁肌肉,咬除T8-9椎板,暴露T7脊髓节段,在手术显微镜下,沿脊髓后正中线剪开硬脊膜,并固定在临近肌肉组织上。
       ③切割脊髓损伤模型组使用10号刀片在显露的脊髓中间位置横向切断脊髓,刀片要触及椎管前壁和侧壁骨面,一次性切割脊髓,但并不移除组织,然后逢合肌肉,皮肤;
       ④切除脊髓损伤模型组使用显微外科剪刀将一段长约5 mm脊髓全部剪断,然后用吸引器于软膜下吸断未横断的脊髓组织,用10号刀片反复刮脊柱内表面以去除残留组织与纤维,由与手术无关人员确认此段无组织残留,术中采用压迫和电凝进行止血,8-0显微缝合线缝合硬脊膜,然后逢合肌肉,皮肤。
       ⑤术后处理:术后严密观察及记录动物精神状态、饮食、尿便、肢体水肿、压疮、泌尿系统感染等情况。给予青霉素20×104 U/次,2次/d,按摩膀胱3次/d,直到膀胱排尿反射功能基本恢复,防止泌尿系统及其他并发症的发生。
术后护理操作方法:实验人员双手戴上棉布厚手套,左手以麻醉大鼠的手法抓取固定大鼠(但是需注意不要过度用力,以免挤压到背部伤口或大鼠胸腔),右手手掌托住大鼠腹背部,右手食指摸索找到膀胱,适当用力挤压膀胱,尿液就会从尿道流出。术后需每天排尿一次,并使用75%酒精在尿道附近喷洒消毒,卫生纸擦拭干净尿道周围污渍。如果护理情况良好,一般术后一周,大鼠会恢复自主排尿功能。前期护理过程中,大鼠可能会尿血,属正常现象。