免疫组化，即免疫组织化学技术，是一项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位、定性的实验技术。
操作步骤
01
切片：
包埋好的蜡块用切片机进行切片
将切成的蜡带平铺在水浴锅中
等待切片完全展开后有防脱载玻片轻轻将切片捞起，使其贴在载玻片上
将载玻片放在切片架上
02
烘片：70℃烘片30-40min
03
脱蜡水化：将切片依次浸入以下溶液
二甲苯Ⅰ15min
二甲苯Ⅱ15min
无水乙醇5min
90%乙醇3min
80%乙醇3min
70%乙醇3min
蒸馏水3min*3次
PBS 3min*3次
04
阻断内源性过氧化物酶：
将3%过氧化氢倒入染色缸
将切片放入染色缸中
避光孵育20min
将切片浸泡于PBS 3min*3次
05
抗原修复：
将柠檬酸钠稀释50倍
将10mL的50x缓冲液中加入到1L的烧杯中，再加入490mL的蒸馏水，玻璃棒搅拌均匀
用微波炉煮沸
将组织切片放入烧杯中
调至中火（P50），保温20min
修复结束后，将烧杯拿出，烧杯和切片一同室温冷却至室温（注：不要将切片从烧杯中拿出）
PBS 3min*3次
06
封闭：
用吸水纸将组织周围的水小心吸干净
用免疫组化笔在组织周围画圈以防止后续抗体流出
在圈中滴加5%山羊血清封闭液至覆盖组织
将切片平放于湿盒中，室温孵育30min
07
一抗孵育：
甩掉封闭液，滴加一抗使其覆盖组织
放入湿盒中，4℃孵育过夜
08
清洗：
第二天取出湿盒后，室温复温30min
回收一抗
将切片依次浸入PBS 3min*3次，蒸馏水5min*2次
09
二抗孵育：
切片甩干水分并吸走水珠
滴加二抗使其覆盖组织
室温孵育120min或4℃孵育过夜
10
DAB显色：
将二抗回收至干净的1.5mL的离心管中
用PBS浸洗切片3min*3次
甩去多余的PBS
在切片上滴加DAB显色液
观察切片染色情况，棕黄色为阳性，染色明显即可用蒸馏水冲洗玻片终止显色
11
复染细胞核：将切片置于苏木素中复染2min，细胞核变蓝色即可终止，并用自来水冲洗
12
分化：将切片置于1%盐酸乙醇中分化5s，使组织由蓝色变成棕黄色，然后自来水冲洗3min
13
脱水：将切片依次浸入以下溶液
70%乙醇1min
80%乙醇1min
95%乙醇2min
100%乙醇4min
14
封片：切片铺平晾干后，滴加适量中性树胶封片
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